Обратная транскрипция

Набор для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript III, с реактивом для удаления геномной ДНК содержит все компоненты, необходимые для синтеза высококачественной кДНК. В состав набора входит смесь ферментов HiScript III содержащая обратную транскриптазу HiScript III, оптимизированный буфер и ингибитор РНКаз,смесь RT, random гексапраймер и олиго(dT)₂₃VN праймер и реактив для быстрого удаления геномной ДНК.

Обратная транскриптаза HiScript III предназначенная для проведения эффективной реакции обратной транскрипции при 37 °С, обладает высокой термостабильностью, при проведении реакции обратной транскрипции по матрице РНК имеющей сложную вторичную структуру, температура реакции может быть повышена до 50 ~ 55 °С, без возникновения ингибирующего эффекта на синтез кДНК, также обладает превосходной способностью к длительному синтезу.

Реактив для удаления геномной ДНК может быстро удалять примеси ДНК в течение 2 минут.

Преимущества набора для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript III

• Обратная транскриптаза HiScriptIII имеет повышенную устойчивость к ингибиторам, обладает оптимальной активностью при 50-55 °С, обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов со сложной вторичной структурой
• быстрое удаление геномной ДНК в течение 2 минут;
• различные типы праймеров для обратной транскрипции могут использоваться для различных экспериментов;
• применим для обратной транскрипции по матрице РНК животных, растений и микробов.

Компоненты	R312-01 50 реакций (20 мкл/реакция)	R312-02 100 реакций (20 мкл/реакция)
Смесь ферментов HiScript III *	100 мкл	200 мкл
Смесь RT (10х)**	100 мкл	200 мкл
Реактив для удаления геномной ДНК (5х)	100 мкл	200 мкл
Random гексапраймер	50 мкл	100 мкл
Олиго(dT)23VN праймер	50 мкл	100 мкл
H2O протестированная на отсутствие нуклеаз	1 мл	1 мл

* Содержит ингибитор РНКаз

** Содержит dNTPs

Примечание: смесь RT (10×) содержит высокую концентрации дитиотреитола (DTT), который может выпадать в осадок при низкой температуре, в этом случае перед использованием нагрейте до комнатной температуры, осторожно встряхните и тщательно перемешайте, дождитесь повторного растворения осадка.

Условия хранения: -20 °С.

Набор для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript II содержит все компоненты, необходимые для синтеза высококачественной кДНК первой цепи. В состав набора входит 2-кратная смесь смесь ферментов HiScript II содержащая обратную транскриптазу HiScript II и ингибитор РНКаз, 2-кратную смесь RT, random гексапраймер и олиго(dT)₂₃VN праймер.

Обратная транскриптаза HiScript II — это новое поколение обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (обратная транскриптаза M-MLV (RNase H-)) с повышенной термостабильностью, устойчивостью к инигибиторам и эффективностью синтеза кДНК.

Олиго (dT)₂₃VN обладает более сильной связывающей способностью для полиА⁺ мРНК, чем Олиго(dT)₁₈, что делает обратную транскрипцию более эффективной. Олиго (dT)₂₃VN, random праймеры или генспецифические праймеры могут быть выбраны в качестве праймеров обратной транскрипции. Набор для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript II может быть использован для синтеза полноразмерной кДНК длиной до 20 кб, продукт пригоден для последующих ПЦР, кПЦР, клонирования и других последующих экспериментов.

Преимущества набора для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript II

• Содержит все компоненты необходимые для проведения реакции обратной транскрипции;
• широкий диапазон исходного количества матрицы, от 1 пг до 5 мкг общей РНК;
• амплификация фрагментов кДНК длиной до 20 тыс. п.н.;
• оптимальная активность обратной транскриптазы HiScript II при 50-55 °С; обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов со сложной вторичной структурой;
• обратная транскриптаза HiScript II имеет устойчивость к большинству ингибиторов ОТ-ПЦР;
• широкий диапазон исходного количества матрицы, от 1 пг до 5 мкг общей РНК, и может амплифицировать фрагменты до 15 кб или более;
• синтезированная кДНК пригодна для последующих ПЦР, кПЦР, клонирования и других экспериментов.

Компоненты	R211-01 50 реакций (20 мкл/реакция)	R211-02 100 реакций (20 мкл/реакция)
Смесь ферментов HiScript II (2х) *	100 мкл	200 мкл
Смесь RT (2х)**	500 мкл	1 мл
Random гексапраймер	50 мкл	100 мкл
Олиго(dT)23VN праймер	50 мкл	100 мкл
H2O протестированная на отсутствие нуклеаз	1 мл	1 мл

* Содержит ингибитор РНКаз

** Содержит 1 мМ каждого dNTP

Условия хранения: -20 °С.

Супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR специально разработан для 2-шаговой ОТ-кПЦР, содержит все компоненты, необходимые для проведения реакции обратной транскрипции, обратную транскриптазу HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)₂₃VN праймеров. Для проведения обратной транскрипции необходимо добавить матричную РНК и H₂O. Объём матричной РНК может составлять до 80% от общего объёма, что очень подходит для реакции обратной транскрипции при низкой концентрации РНК.

Обратная транскриптаза HiScript II — это новое поколение обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (обратная транскриптаза M-MLV (RNase H-)) с повышенной термостабильностью и эффективностью синтеза кДНК.

Преимущества супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR

• Простая постановка реакции;
• оптимальная активность обратной транскриптазы HiScript II при 50-55 °С; обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов со сложной вторичной структурой;
• обратная транскриптаза HiScript II имеет устойчивость к большинству ингибиторов ОТ-ПЦР;
• амплификация фрагментов кДНК длиной до 20 тыс. п.н.;
• синтезированная кДНК совместимы для проведения ПЦР в реальном времени с SYBR или кПЦР на основе флуоресцентно-меченных зондов;
• соотношение Random- и олиго(dT)23VN праймеров оптимизировано для обеспечения синтеза кДНК в любой области матричной РНК и воспроизводимости результатов кПЦР.

Компоненты	R222-01 100 реакций (20 мкл/реакция)
Супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х)*	400 мкл
Отрицательный контроль No RT Control (5х)**	40 мкл
H2O протестированная на отсутствие нуклеаз	2×1 мл

* Состав супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х): обратная транскриптаза HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)₂₃VN праймеров, буфер для проведения реакции.

**Отрицательный контроль No RT Control содержит те же компоненты как супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х), за исключением обратной транскриптазы.

Условия хранения: -20 °С.

Область применения: синтез первой цепи кДНК для ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени, синтез кДНК для клонирования, получение меченых кДНК-зондов для микрочипов (microarray), мечение ДНК, анализ РНК с помощью праймер-экстеншн.

Обратная транскриптаза RevertAid — это рекомбинантная обратная транскриптаза вируса лейкемии мышей (M-MuLV) с модифицированной структурой и каталитическими свойствами. Фермент обладает РНК-зависимой и ДНК-зависимой полимеразной активностью. Обратная транскриптаза RevertAid проявляет активность РНКазы Н в меньшей степени, чем обратная транскриптаза вируса миелобластоза птиц (AMV-RT).

Особенности обратной транскриптазы RevertAid

Обратная транскриптаза RevertAid имеет следующие особенности:

• cинтезирует первую цепь кДНК до 13 тыс п.н.;
• оптимальная температура реакции +42 °С;
• активна до +50 °С;
• способна встраивать модифицированные нуклеотиды — меченые Су3, Су5, родамином родамином или флюоресцеином.
  

Области применения обратной транскриптазы RevertAid

Обратная транскриптаза RevertAid применяется в следующих областях:

• синтез первой цепи кДНК в реакциях ОТ-ПЦР или ОТ-ПЦР в реальном времени;
• синтез кДНК для клонирования или экспрессии белков;
• мечение ДНК для микрочипов;
• анализ РНК с помощью праймер-экстеншн.

Комплектуется 5-кратным реакционным буфером.

Условия хранения: -20 °С.

Рекомбинантная форма, выделенная из E. coli, не содержит доменa РНКазы Н Буфер хранения: 50 мМ трис-HCl, pH 8,0 (при 25°C ), 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ дитиотрейтол, 50 % глицерин и 0,1 % NP-40. Условия определения активности: 50 мМ трис-HCl, pH 8,3 (при 25°С), 40 мМ KCl, 6 мМ KCl, 50 мM [3H] dTTP, 1 мМ дитиотрейтол, poly А 2 А260/мл, 2 мкМ d(pT)12, 100 мкг/мл БСА. Определение активности: За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTMP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при 37°С. Хранение и транспортировка: -20°С

Обратная транскриптаза Maxima H minus представляет собой генетически модифицированную обратную транскриптазу MMLV. Фермент обладает РНК-зависимой и ДНК-зависимой полимеразной активностью, но лишён активности РНКазы Н. Поставляется в комплекте с 5-кратным буфером RT (250 мМ Трис-HCl pH 8,3, 375 мМ KCl, 15 мМ MgCl₂, 50 мМ DTT).

Основные характеристики обратной транскриптазы Maxima H minus

Обратная транскриптаза Maxima H minus имеет следующие характеристики:

• термостабильность — температурный оптимум составляет от +50 до +60 °С, фермент сохраняет активность до 65 °С;
• отсутствие РНКазной активности позволяет синтезировать кДНК до 20 тыс. п.н.;
• высокая чувствительность и воспроизводимость — стартовое количество РНК может варьировать от 1 пг до 5 мкг;
• высокая эффективность — синтез полноразмерных кДНК занимает 15-30 минут;
• 50-кратная процессивность (по сравнению с ревертазой MMLV) обеспечивает устойчивость к ингибиторам-гуанидину, формамиду, этанолу;
• способна встраивать модифицированные нуклеотиды.